慢病毒介导的c-Myc启动子结合蛋白1过表达 对结肠癌HCT116细胞增殖与凋亡的影响 及其机制研究

《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》[ISSN:2095-1221/CN:11-9310/R] 期数: 2020年第10卷第1期 栏目: 论著

作者:李月华,曹爽

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页码:32

摘要:

【摘要】 目的 探讨慢病毒介导的c-Myc启动子结合蛋白1 (MBP-1)过表达对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法 将体外培养的HCT116细胞分为以下3组:空白对照组,细胞未做任何处理;空载感染组,空载体对照慢病毒 (LV-GFP)感染HCT116细胞;MBP-1过表达慢病毒组 (MBP-1组),MBP-1过表达的重组慢病毒 (LV-MBP-1-GFP)感染HCT116细胞。RT-PCR检测各组细胞中MBP-1 mRNA的表达,CCK-8实验检测细胞的增殖能力,流式细胞仪检测细胞的周期变化,Western blot检测细胞中MBP-1、NF-κB p65、c-Myc、CyclinD1及细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3的表达。三组间比较采用单因素方差分析,方差齐性采用F检验,若方差齐则组间比较采用LSD检验,若方差不齐则组间比较采用Dunnett检验。结果 与空载感染组比较,MBP-1组在MBP-1 mRNA (1.02±0.15比4.56±1.03)、蛋白表达水平(0.18±0.01比0.72±0.10)、S期百分比[(39.12±2.18)﹪比 (45.64±3.21)﹪]、G2/M期的百分比[(14.81±1.02)﹪比 (23.16±2.12)﹪]、细胞中Bax蛋白 (0.55±0.10比0.76±0.11)、cleaved caspase-3蛋白 (0.45±0.08比0.81±0.11)表达水平均升高,差异具有统计学意义(P均< 0.001),而细胞48 h OD值 (0.58±0.08比0.43±0.03)、72 h OD值(1.10±0.13比0.52±0.09)、细胞G0/G1期的百分比[(46.06±1.89)﹪比(31.36±2.02)﹪]、细胞中Bcl-2蛋白 (0.52±0.10比0.23±0.02)、NF-κB p65蛋白 (0.61±0.13比0.16±0.03)、c-Myc蛋白(0.79±0.15比0.43±0.05)、CyclinD1蛋白(0.62±0.09比0.32±0.01)的表达水平均降低,差异具有统计学意义(P均< 0.001);空白对照组和空载感染组之间各指标差异无统计学意义(P > 0.05)。结论 MBP-1过表达可抑制HCT116细胞增殖及诱导细胞周期阻滞于S期,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路活化有关。
【关键词】 慢病毒; 结肠癌; c-Myc基因; 细胞增殖; 凋亡; NF-κB信号通路
 
 
【摘要】 目的 探讨慢病毒介导的c-Myc启动子结合蛋白1 (MBP-1)过表达对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法 将体外培养的HCT116细胞分为以下3组:空白对照组,细胞未做任何处理;空载感染组,空载体对照慢病毒 (LV-GFP)感染HCT116细胞;MBP-1过表达慢病毒组 (MBP-1组),MBP-1过表达的重组慢病毒 (LV-MBP-1-GFP)感染HCT116细胞。RT-PCR检测各组细胞中MBP-1 mRNA的表达,CCK-8实验检测细胞的增殖能力,流式细胞仪检测细胞的周期变化,Western blot检测细胞中MBP-1、NF-κB p65、c-Myc、CyclinD1及细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3的表达。三组间比较采用单因素方差分析,方差齐性采用F检验,若方差齐则组间比较采用LSD检验,若方差不齐则组间比较采用Dunnett检验。结果 与空载感染组比较,MBP-1组在MBP-1 mRNA (1.02±0.15比4.56±1.03)、蛋白表达水平(0.18±0.01比0.72±0.10)、S期百分比[(39.12±2.18)﹪比 (45.64±3.21)﹪]、G2/M期的百分比[(14.81±1.02)﹪比 (23.16±2.12)﹪]、细胞中Bax蛋白 (0.55±0.10比0.76±0.11)、cleaved caspase-3蛋白 (0.45±0.08比0.81±0.11)表达水平均升高,差异具有统计学意义(P均< 0.001),而细胞48 h OD值 (0.58±0.08比0.43±0.03)、72 h OD值(1.10±0.13比0.52±0.09)、细胞G0/G1期的百分比[(46.06±1.89)﹪比(31.36±2.02)﹪]、细胞中Bcl-2蛋白 (0.52±0.10比0.23±0.02)、NF-κB p65蛋白 (0.61±0.13比0.16±0.03)、c-Myc蛋白(0.79±0.15比0.43±0.05)、CyclinD1蛋白(0.62±0.09比0.32±0.01)的表达水平均降低,差异具有统计学意义(P均< 0.001);空白对照组和空载感染组之间各指标差异无统计学意义(P > 0.05)。结论 MBP-1过表达可抑制HCT116细胞增殖及诱导细胞周期阻滞于S期,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路活化有关。
【关键词】 慢病毒; 结肠癌; c-Myc基因; 细胞增殖; 凋亡; NF-κB信号通路